海克隆胎牛血清的使用所產(chǎn)生的常見問題
由于血清營養(yǎng)豐富,貯存條件特殊,因此在貯存和使用過程中容易產(chǎn)生以下問題:
1、改變培養(yǎng)液的pH值
海克隆胎牛血清的pH理論值為7.0~8.0,培養(yǎng)基在加入規(guī)定量的碳酸氫鈉后(即達到細胞生長所需要的滲透壓),再加入10%的海克隆胎牛血清,一般會使培養(yǎng)液的pH值發(fā)生改變。因此在使用過程中應注意pH的變化,如有必要可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl調(diào)pH到所需值。
2、由于海克隆胎牛血清的營養(yǎng)成分豐富,非常適合細菌、真菌和支原體等生長。海克隆胎牛血清大部分采用手工分裝,因此容易把微生物帶入而使得血清被污染。使用前如果沒有及時發(fā)現(xiàn),將會把污染物帶入正在培養(yǎng)的細胞中,而使得細胞不能正常生長。
3、海克隆胎牛血清在貯存解凍過程中會產(chǎn)生沉淀,這是由于海克隆胎牛血清中含有大量脂蛋白、纖維蛋白及多肽類物質(zhì),在-15℃冷凍保存解凍后就會自然形成沉淀,隨著保存時間的延長,沉淀量會增加。因此在融化血清時一般應先在4℃放置使之解凍,然后放在室溫使血清*融化,以避免沉淀的增加。添加海克隆胎牛血清時應避免把沉淀加入培養(yǎng)液,否則由于沉淀的存在會使得所培養(yǎng)的細胞產(chǎn)生大量黑點,或者細胞表面將會覆蓋一層油狀物質(zhì),影響細胞的正常生長。為減少海克隆胎牛血清的損失,可以把有沉淀的血清收集起來進行離心處理,將上清液加入培養(yǎng)液使用(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。