B27無血清培養(yǎng)基的使用展現了一種重要的培養(yǎng)方法：允許細胞培養(yǎng)

在一套限定條件下進行，盡可能避免受到干擾參數的影響。

 

細胞適應B27無血清培養(yǎng)基的方法

1.直接適應——細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉換到B27無血清培養(yǎng)基中。

一些類型細胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應B27無血清培養(yǎng)基。對于直接適應，接種細胞密度應該:2.5×105~3.5×105細胞/ml。當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml時，傳代培養(yǎng)細胞。當細胞密度在培養(yǎng)4到7天后達到2×106~4×106細胞/ml時，細胞*適應了無血清培養(yǎng)基。每隔3~5天，當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml，細胞活率在90％時，貯備的適應了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應該再次傳代培養(yǎng)。

2.連續(xù)適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉換到B27無血清培養(yǎng)基中，與直接適應相比較，連續(xù)適應趨向對于細胞更加溫和一些。

（1）以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養(yǎng)物到80%有血清培養(yǎng)基：30％sfm混合培養(yǎng)基中，傳代培養(yǎng)。

（2）當細胞密度>5×105細胞/ml時，以2×105到3×105細胞/ml細胞密度，在有血清培養(yǎng)基：sfm為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。

（3）以2×106到3×106細胞/ml細胞密度，25％有血清培養(yǎng)基和75%sfm中傳代培養(yǎng)。

（4）當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml（接種后4到6天），在100％sfm培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。

（5）每隔3到5天，當細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml，細胞活率在90％時，貯備的適應了B27無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應該再次傳代培養(yǎng)。