32400梅里埃腸桿菌G-鑒定試劑（ID 32 E）說明書

32400梅里埃腸桿菌G-鑒定試劑（ID 32 E）說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:腸桿菌和其他非苛養(yǎng)革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒(比色法)

英文名稱:API 20 E

【包裝規(guī)格】

25 測試/盒、100 測試/盒。

【預(yù)期用途】

該產(chǎn)品用于腸桿菌和其它非苛養(yǎng)革蘭氏陰性桿菌的鑒定。

該產(chǎn)品用于可導(dǎo)致腹瀉、血流感染、尿路感染等的腸桿菌和其它非苛養(yǎng)革蘭氏陰性桿菌的鑒定,臨床常

見樣本來源有糞便、直腸拭子、尿、血等。

【檢驗原理】

API 20 E 試條由 20 個含干燥底物的微量小管組成。將菌懸液接種到管內(nèi),使小管內(nèi)底物溶解。孵育過

程中,所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物通過自發(fā)反應(yīng)或加入附加試劑后而變色。鑒定結(jié)果可根據(jù)說明書的判讀表進行

讀出,也可參照生化譜檢索手冊或鑒定軟件,得到鑒定結(jié)果。

【樣本要求】

API 20 E 不能直接用于臨床或其他標本(例如血樣,尿樣和糞樣、直腸拭子等等)。需要進行鑒定的微

生物必須首先根據(jù)標準微生物處理技術(shù)于適合腸桿菌和/或非苛養(yǎng)革蘭陰性桿菌生長的培養(yǎng)基上分離培

養(yǎng)。

【檢驗方法】

氧化酶試驗:

必須按照制造商的使用說明進行氧化酶試驗。由于它是最終圖譜的組成部分,請將其結(jié)果記錄于報告單

上( 十一個試驗)。

試條的準備

? 準備一個培養(yǎng)盒(盤和蓋子),倒入約 5mL 蒸餾水或軟化水【或其它不含添加劑或不含有能產(chǎn)生揮發(fā)

性氣體(如 Cl2, CO2,等)的化學(xué)物質(zhì)的水】于盤的蜂窩小凹中,造成一個濕室。

? 在盤的長邊寫上菌株號(不要寫在蓋上,因為操作過程中很容易將蓋子放到其它試條上)

? 從包裝中取出試條。

? 將試條置于培養(yǎng)盒中。

注意:API 20 E 只能用于腸道細菌和或非苛養(yǎng)的革蘭陰性桿菌。苛養(yǎng)菌由于對營養(yǎng)有特殊要求并且需要

合適的防護措施(例如布魯氏菌屬 Brucella 和法朗西絲菌屬 Francisella),這些菌沒有包括在 API 20 E 數(shù)

據(jù)庫中。 必須采用其它方法,來排除或確認這些菌的存在。

接種物的準備

? 根據(jù)“警告及注意"一欄所列方法打開一安瓿 API 0.85% NaCl 培養(yǎng)基(5mL)或一安瓿 API 懸浮培養(yǎng)(5

mL), 或用含 5mL 0.85 NaCl 鹽水或不含添加劑的無菌蒸餾水。

? 用吸管或 PSIpette 從分離平板上挑取單個分純菌落至懸浮基物中。建議使用新鮮培養(yǎng)物(18-24

時)。

? 仔細研勻以達到均一的細菌懸液。

制備好的菌懸液必須立即使用。

注意:大多數(shù)弧菌(Vibrio)均嗜鹽,如懷疑菌株為弧菌,請使用 0.85% NaCl (5mL)培養(yǎng)基。腸桿菌和其它非苛養(yǎng)革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒(比色法) 版本號 07584J- zh -2010/05

試條的接種

? 用同一根吸管,將菌懸液加入到試條的小管內(nèi)。為避免在小管的基底部形成氣泡,請將試條輕微向前

傾斜并把吸管或者 PSI 管緊靠小杯邊緣加入菌液):

- CIT、VP 和 GEL 小管,菌液需充滿的管部和杯部。

- 其它管僅充滿管部(不是杯部)。

- 在試驗 ADH, LDC, ODC, H2S 和 URE 小杯內(nèi)加入礦物油以形成厭氧環(huán)境。

? 蓋上培養(yǎng)盒。于 36℃±2℃孵育 18~24 小時。

【陽性判斷值】

請參考本說明書后的“反應(yīng)鑒定表",表中列出了各種生化反應(yīng)預(yù)期結(jié)果范圍。

【檢驗結(jié)果的解釋】

試條的判讀

? 孵育后,根據(jù)判讀表表判讀各反應(yīng)結(jié)果。

? 如果 3 個或 3 個以上測定(GLU 試驗+或-)為陽性結(jié)果,記錄所有自發(fā)反應(yīng)于結(jié)果報告單上并觀察需

附加試劑的試驗的結(jié)果:

- TDA 試驗:加 1 滴 TDA 試劑。深褐色為陽性反應(yīng),記錄于報告單上。

- IND 試驗:加 1 滴 JAMES 試劑。整個反應(yīng)管出現(xiàn)粉紅色者為陽性,記錄于報告單上。

- VP 試驗:加 1 滴 VP 1 和 1 滴 VP 2 試劑。至少等待 10 分鐘,出現(xiàn)粉紅或紅色者表明為陽性結(jié)果,

記錄于報告單上。如淺粉紅色在 10 至 12 分鐘內(nèi)出現(xiàn),判斷結(jié)果為陰性。

注意:吲哚產(chǎn)生試驗必須 進行,因為該反應(yīng)釋放的氣體產(chǎn)物會千擾試條的其他試驗。在加入附加

試劑后,請小心勿調(diào)換培養(yǎng)盒蓋。

? 如果加入附加試劑前陽性結(jié)果(包括 GLU 試驗)的數(shù)量少于 3 個:

- 重新培養(yǎng) 24 小時(土 2 小時),且不要加任何試劑。

- 重新進行需要加入附加試劑的試驗(如前說明)。

- 為了完成鑒定,可能需要進行補充試驗(參考有關(guān)鑒定的段落)。

解釋

鑒定結(jié)果根據(jù)數(shù)值編碼獲得。

? 數(shù)值編碼的確定:

在結(jié)果報告單,每 3 個試驗為一組,每個陽性試驗分別賦予數(shù)值 1、2 或 4,在每組中,陽性反應(yīng)以相

應(yīng)的數(shù)值相加,由此可得到一個 7 位數(shù)字的編碼。氧化酶反應(yīng)構(gòu)成第 21 個試驗,如陽性則賦予數(shù)值 4。

? 鑒定:

鑒定結(jié)果是根據(jù)數(shù)據(jù)庫(V4.1)得到。

*根據(jù)鑒定檢索手冊:

- 從檢索手冊中查找數(shù)值編碼。

*根據(jù) apiweb TMM鑒定軟件:

- 在鍵盤上輸入 7 位數(shù)字的數(shù)值編碼。

在某些情況下,7 位數(shù)字的數(shù)值編碼還不能區(qū)分細菌,必須進行以下一些補充試驗來進一步的鑒定:

- 硝酸鹽還原到亞硝酸鹽(NO2)和氮氣(N2):各加一滴 NIT 1 和 NIT2 試劑于葡萄糖(GLU 管內(nèi),待 2~3

鐘后,紅色表示陽性結(jié)果(NO2)。陰性反應(yīng)(黃色)可能由于還原至 N2 (有時還有氣泡):加 2-3mg 鋅

粉到葡萄糖(GLU)管,5 分鐘后,如果管保持黃色表示陽性結(jié)果(N2),記錄于報告單。如果變?yōu)殚偌t,

則是陰性反應(yīng):仍留在管內(nèi)硝酸鹽被鋅粉還原。該反應(yīng)對檢測革蘭陰性、氧化酶陽性的桿菌有用。

注意:出于和吲哚試驗同樣的原因(參考“試條的判讀"中的注意項),硝酸鹽還原試驗必須 進行。

- 動力(MOB):接種一安瓿 APIM 培養(yǎng)基(參見產(chǎn)品說明書)。腸桿菌和其它非苛養(yǎng)革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒(比色法) 版本號 07584J- zh -2010/05

- 麥康凱(MacConkey)培養(yǎng)基生長實驗(McC):接種一個麥康凱(MacConkey)平板(參見產(chǎn)品說明書)。

- 葡萄糖氧化(0F-0):接種一安瓿 API OF 培養(yǎng)基(參見產(chǎn)品說明書)。

- 葡萄糖發(fā)酵(OF-F):接種一安瓿 API OF 培養(yǎng)基(參見產(chǎn)品說明書)。

這些在數(shù)值編碼本開始部分有所介紹的補充試驗,可以組成 9 位數(shù)的數(shù)值索引。從而可以用鑒定軟件

獲得鑒定結(jié)果。