DNA產(chǎn)物純化試劑盒

DNA純化試劑盒

原理簡介
本試劑盒利用*的緩沖液，可從PCR產(chǎn)物，連接產(chǎn)物，酶切產(chǎn)物等溶液中回收較大DNA片段，同時除去其它蛋白、無機鹽及寡核苷酸引物等雜質。
對于50ul的含DNA樣品，本試劑盒（以100T為例）可用100次。對于更小體積的樣品，本試劑盒使用次數(shù)更多。如果一次純化1ml樣品，本試劑盒（以100T為例）可用5次。

DNA產(chǎn)物純化試劑盒注意事項
1、回收<200bp DNA片段時，應加大結合液的體積（如8倍體積或者更高）。
2、玻璃奶的多少決定吸附能力的大小，對于核酸含量低的樣品，可適當減少加入量，同時減少加入洗脫液的量（TE緩沖液）。
3、如非指明，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
操作步驟
1．將含有DAN的樣品離心，取上清轉移到一新的離心管中（如無沉淀，可省去此步）。
2．向溶液中加入5倍體積結合液（如為小片段，可加入8倍體積或者更高體積）混勻。正常情況應該為淡黃色，如溶液變紅，請加入不超過1/10體積的3M 乙酸鈉 PH5.2。
3．玻璃奶混勻。取50ul混勻的玻璃奶加入上面溶解的溶膠液中，混勻（如DNA含量過低，可減少玻璃奶加入量，如只加入20ul）。
4．室溫放置2-3分鐘。期間可翻轉混勻1-2次。
5．10000轉/分鐘離心1分鐘，去上清；沉淀加入1ml 70%乙醇，振蕩混勻，10000轉/分鐘離心1分鐘，去上清，70%乙醇重復洗一次，再用無水乙醇洗一次。去上清，再次離心2分鐘，用小吸頭吸去上清（70%乙醇洗兩次，無水乙醇洗一次）。
6．室溫放置10分鐘，加入50ul左右TE緩沖液混勻溶解，50-55℃水浴5分鐘。離心，取上清轉移到一新的離心管中。此為所提質粒。
7．電泳或者其他方法檢測，進入下游實驗。